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服務(wù)介紹：

      植物過(guò)氧化物酶(POD)檢測(cè)試劑盒(愈創(chuàng)木酚微板法)檢測(cè)原理是以愈創(chuàng)木酚(又稱2-甲氧基酚)作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測(cè)定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀470nm處測(cè)定吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶活性，尤其適用于測(cè)定水果中過(guò)氧化物酶活性。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、 準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取0.5-1.0g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的POD Lysis Buffer研磨或勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于過(guò)氧化物酶的測(cè)定。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用POD Lysis Buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g離心15~20min，留取上清液，即為POD粗提液，

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的過(guò)氧化物酶，可以使用POD Lysis Buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、 配制POD Assay Buffer工作液：取適量的POD氧化劑和POD Assay Buffer，按POD氧化劑：POD Assay Buffer=1：14混合，

3、 POD加樣：取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔孔、測(cè)定孔，注意：對(duì)照孔、測(cè)定孔中為同一待測(cè)樣品，但對(duì)照孔中是提前加熱煮沸5min的樣品

 4、 POD測(cè)定：立即以酶標(biāo)儀，以對(duì)照孔為對(duì)照，測(cè)定470nm處測(cè)定孔的吸光度(A測(cè)定0)；37℃準(zhǔn)確孵育3min后，立即加入5μl POD終止液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照，以酶標(biāo)儀測(cè)定470nm處測(cè)定孔的吸光度(A測(cè)定1)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

全自動(dòng)生化儀檢測(cè)后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運(yùn)輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)

準(zhǔn)確稱取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。

2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)

全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜（GLU檢測(cè)請(qǐng)勿全血樣本放置過(guò)夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

4、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來(lái)，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！